9:16 AM Laporan Mikrobiologi Umum Sterilisasi Alat dan Pembuatan Media

Laporan Mikrobiologi Umum

Sterilisasi Alat dan Pembuatan Media

I.     Pendahuluan

I.1 Latar Belakang

Untuk menelaah mikroorganisme di laboratorium, kita harus dapat menumbuhkan mereka. Mikroorganisme dapat berkembang biak dengan alami atau dengan bantuan manusia. Mikroorganisme yang dikembangkan oleh manusia diantaranya melalui substrat yang disebut media. Untuk melakukan hal ini, haruslah dimengerti jenis-jenis nutrien yang diisyaratkan oleh bakteri dan juga macam lingkungan fisik yang menyediakan kondisi optimum bagi pertumbuhannya.

Dalam melakukan diagnosa Mikrobiologi sterilisasi sangat diutamakan baik alat maupun medianya. Suatu alat dikatakan steril apabila alat atau bahan bebas dari mikroba baik dalam bentuk vegetative  maupun spora. Untuk itu sebagai pemula dalam Mikrobiologi sangat perlu mengenal teknik sterilisasi, pembuatan media serta teknik penanaman .Secara umum sterilisasi merupakan proses pemusnahan kehidupan khususnya mikrobia dalam suatu wadah ataupun peralatan laboratorium. Sterilisasi dalam mikrobiologi adalah suatu proses untuk mematikan semua mikroorganisme yang terdapat pada atau didalam suatu benda.

I.2 Tujuan

Tujuan dilakukannya praktikum ini adalah

1.    Mengetahui prinsip – prinsip sterilisasi

2.    Mengetahui metode – metode sterilisasi

3.    Mengetahui jenis – jenis media

II.  Metode Percobaan

II.1 Alat dan Bahan

Alat – alat yang digunakan dalam praktikum ini adalah

·         Batang pengaduk ·         Erlenmeyer ·         Sendok tandu ·         Timbangan analitik ·         Hot plate ·         Gelas ukur ·         Lap halus ·         Tabung  reaksi ·         Cawang petri ·         Gelas kimia ·         Pipet volume

·         Botol semprot ·         Sprayer ·         Autoclave ·         Ose tusuk ·         Ose bulat ·         Bunsen ·         Oven ·         Nampan ·         Sponge ·         Sarung tangan

     Bahan – bahan yang digunakan dalam praktikum ini adalah

·         Natrium Agar (NA) ·         Plate count Agar (PCA) ·         Potato Dekstora Agar (PDA) ·         Aquades ·         Aluminium foil ·         Kapas ·         Tissue ·         Sabun

·         Label ·         Kertas bekas ·         Tabung gas ·         Kentang ·         Tauge ·         Dekstrosa agar ·         sukrosa

II. 2 Prosedur kerja

2.1  Sterilisasi Alat

2.1.1  Sterilisasi Fisik

a.       Menggunakan Autoklaf

Alat alat kaca yang akan disterilkan dicuci dengan sabun dan dikeringkan dengan tisu, Setelah itu alat alat tersebut dibungkus dengan kertas, kapas dan aluminium foil dengan ketentuan:

-          Cawan petri dibungkus dengan kertas

-          Pipet volume dan pipet ukur, mulut pada pipet ditutup dengan kapas, lalu dibungkus dengan kertas

-          Tabung reaksi, mulut tabung reaksi ditutup dengan kapas, lalu dibungkus dengan kertas

-          Enlemeyer, mulut enlemeyer ditutup dengan kapas, setelah itu mulut dan leher enlemeyer dibungkus dengan aluminium foil

-          Semua alat diberi label sebagai perekat dan penanda

Semua alat yang telah dibungkus ditata dalam panci autoklaf, Semua alat di masukkan ke dalam autoklaf, setelah air dalam autoklaf diperiksa terlebih dahulu, Semua alat desterilkan pada autoklaf dengan tekanan 1atm, dan suhu 121^oC selama 15 menit, Ditunggu hingga tekanan dan suhunya turun (60-80^oC), Setelah itu semua alat dikeluarkan dan dikeringkan dalam oven,

b.      Menggunakan Bunsen

Ose bulat dan Ose lurus Dibersihkan, disiapkan Bunsen dan tabung gas (dirakit), Kawat pada ose bulat dan ose lurus dilewatkan pada nyala api pada Bunsen sampai kawat berwarna merah, setelah itu alat didinginkan dan siap untuk digunakan atau diapalikasikan

2.1.2  Sterilisasi Kimia

Semua alat-alat gelas di bersihkan dengan sabun kemudian dicuci dengan air bersih,setelah dicuci di keringkan dengan tissu roll setelah kering lalu alat seperti gelas kimia di gosok dengan kapas + alkohol,cawan petri di gosok dengan kapas + alkohol,tabung reaksi dan erlenmeyer di kocok alkohol,dan pipet volume dilewatkan dengan menggunakan botol semprot, alat kemudian siap di gunakan.

Jika untuk penggunaan waktu lain bisa di bungkus dan di simpan di tempat kering lalu di beri tabel.

2.2  Pembuatan Media

2.2.1        Media Semi Sintesis

Pembuatan media semi sintesis dilakukan dengan cara pertama-tama bahan media semi sintesis dicuci, dipotong dan ditimbang, kemudian dimasak selama 20 menit dengan menambahkan aquades 200 ml, setelah masak bahan disaring lalu, ditambah agar sukrosa, setelah itu dihomogenkan memggunakan microwave, setelah dihomogenkan ditutup kapas dan aluminium foil untuk disterilkan.

2.2.2    Media Sintesis

Pembuatan media sintesis dapat dilakukan dengan cara yaitu terlebih dahulu media ditimbang  sesuai takaran pada kemasan, setelah itu media dimasukkan kedalam Erlenmeyer dan ditambahkan aquades 200 ml. bahan PDA dihomogenkan menggunakan microwave sedangkan NA dan PCA dihomogenkan menggunakan hot plate setelah dihomogenkan disterilkan menggunakan autoclave.

III.Hasil dan Pembahasan

III.1 Hasil

Hasil yang diperoleh dari praktikum ini adalah sebagai berikut:

Tabel 01. Hasil Pengamatan Sterilisasi

NO	Jenis Sterilisasi		Alat yang disterilisasi
1	Sterilisasi kimia		-          Cawan Petri -          Gelas Kimia -          Enlemeyer -          Pipet Volume (8 ml) -          Tabung Reaksi
2			-          Cawan Petri -          Tabung Reaksi -          Enlemeyer -          Pipet Ukur -          Pipet Volume
	Sterilisasi Fisik	a.       Autoklaf
		a.       Bunsen	-          Ose Bulat -          Ose Lurus

Sumber : Data Primer hasil praktikum aplikasi teknik laboratorium, 2016

Tabel 02. Hasil Pengamatan Pembuatan Media Semi Sintesis

No	Jenis Media	Komposisi	Warna
1.	TEA (Touge Ekstrak Agar)	Toge 10 % , Sukrosa 6%, Aquades 200 ml, Agar-agar 1,5 %	Berwarna : coklat kemerahan
2.	Merk : BD (becton, dickinson and company ) Nama: PDA (Potato Dekstora Agar)	Kentang 10 %, Sukrosa 1 %, Aquades 200 ml, Agar-agar 1 %.	Berwarna : Hijau bening

Sumber : Data Primer hasil praktikum aplikasi teknik laboratorium, 2016

Tabel 03. Hasil Pengamatan Pembuatan Media Sintesis

No.	Jenis Media	Komposisi	Warna
			Sebelum	Sesudah
1.	Merk : BD (becton, dickinson and company ) Nama : PDA ( Potato Dekstora Agar )	7, 8010 gr / 200 ml Aquades	Serbuk Media PDA : Agak halus, berwarna kuning. setelah	dihomogenkan : berwarna kuning bening.
2.	Merk : Merck Nama : NA ( Natrium Agar )	4,0339 gr  / 200 ml  Aquades	Serbuk Media NA : berwarna kuning	setelah dihomogenkan : berwarna kuning bening
3.	Merk : Merck Nama : PCA ( Plate Count Agar )	4,5012 gr / 200 ml Aquades	Serbuk Media PCA : berwarna putih	Setelah dihomogenkan : berwarna jernih kekuning-kuningan

Sumber : Data Primer hasil praktikum aplikasi teknik laboratorium, 2016

III.2 Pembahasan

III.2.1 Defenisi Sterilisasi

Sterilisasi dalam mikrobiologi menurut Curtis (1999) berarti membebaskan tiap benda atau substansi dari semua kehidupan dalam bentuk apapun. Untuk tujuan mikrobiologi dalam usaha mendapatkan keadaan steril, mikroorganisme dapat dimatikan setempat oleh panas (kalor), gas-gas seperti formaldehide, etilenoksida atau betapriolakton oleh bermacam-macam larutan kimia; oleh sinar lembayung ultra atau sinar gamma. Mikroorganisme juga dapat disingkirkan secara mekanik oleh sentrifugasi kecepatan tinggi atau oleh filtrasi.

Pentingnya penggunaan alat-alat laboratorium yang bersih dapat lebih ditekankan lagi. Semua alat kaca haruslah dalam keadaan bersih.Cara membersihkan tabung reaksi yaitu dengan menggunakan air aquadest setelah itu dikeringkan dengan menggunakan lap halus tetapi cara melapnya hanya bagian luarnya saja steril akan didapatkan melalui sterilisasi.

III.2.2 Macam –macam sterilisasi

a.       Sterilisasi fisik

Sterilisasi secara fisik dapat dilakukan dengan pemanasan & penyinaran.

-   Pemanasan

a. Pemijaran (dengan api langsung): membakar alat pada api secara langsung, contoh alat : jarum inokulum, pinset, batang L, dll.

b. Panas kering: sterilisasi dengan oven kira-kira 60-1800C. Sterilisasi panas kering cocok untuk alat yang terbuat dari kaca misalnya erlenmeyer, tabung reaksi dll.

c. Uap air panas: konsep ini mirip dengan mengukus. Bahan yang mengandung air lebih tepat menggungakan metode ini supaya tidak terjadi dehidrasi.

d. Uap air panas bertekanan : menggunalkan autoklaf

-   Penyinaran dengan UV

Sinar Ultra Violet juga dapat digunakan untuk proses sterilisasi, misalnya untuk membunuh mikroba yang menempel pada permukaan interior Safety Cabinet dengan disinari lampu UV

b.      Sterilisasi kimiawi

Sterilisaisi secara kimiawi biasanya menggunakan senyawa desinfektan antara lain alkohol.

Sterilisasi dengan panas adalah unit operasi dimana bahan dipanaskan dengan suhu yang cukup tinggi dan waktu yang cukup lama untuk merusak mikrobia dan aktivitas enzim. Sebagai hasilnya, bahan yang disterilkan akan memiliki daya simpan lebih dari enam bulan pada suhu ruang. Contoh proses sterilisasi adalah produk olahan dalam kaleng seperti kornet, sarden dan sebagainya.

III.2.3 Hal- hal yang perlu diperhatikan dalam proses sterilisasi

            a.       Sterilisator (alat untuk mensteril) harus siap pakai, bersih, dan masih berfungsi.

b.      Peralatan yang akan di steralisasi harus dibungkus dan diberi label yang jelas dengan menyebutkan jenis peralatan, jumlah, dan tanggal pelaksanaan  sterilisasi.

c.       Penataan alat harus berprinsip bahwa semua bagian dapat steril.

d.      Tidak boleh menambah peralatan dalam sterilisator sebelum waktu mensteril selesai.

e.       Memindahklan alat steril ke dalam tempatnya dengan korentang steril

f.       Saat mendinginkan alat steril tidak boleh membuka pembungkusnya, bila terbuka harus dilakukan steralisasi ulang.

III.2.4 Defenisi media

·      Medium sintesis, yaitu media yang komposisi zat kimianya diketahui jenis    dantakarannya secara pasti, misalnya Glucose Agar, Mac Conkey Agar.

·      Medium semi sintesis, yaitu media yang sebagian komposisinya diketahui secara pasti,misanya PDA (Potato Dextrose Agar) yang mengandung agar, dekstrosa dan ekstrakkentang. Untuk bahan ekstrak kentang, kita tidak dapat mengetahui secara detail tentangkomposisi senyawa penyusunnya.

·      Medium non sintesis (Media), yaitu media yang dibuat dengan komposisi yang tidak dapatdiketahui secara pasti dan biasanya langsung diekstrak dari bahan dasarnya, misalnya Tomato Juice Agar, Brain Heart Infusion Agar, Pancreatic Extract.

Daftar Pustaka

Anonim,Sterilisasi/secara/fisika.html, http://www.finderonly.com

Cahyani Vita Ratri. 2014. Pentunjuk pratikum mikrobiologi pertanian.Surkarta : universitas Sebelas Maret

Dra. Ammi S. M.S., Dra. Yanti H. M.Si., Kusnadi, S.Pd., M.Si.2012.Pembuatan Media agar dan   Sterilisasi.bandung : upi

Purwanti Widhy. 2009. Alat dan Bahan Kimia Dalam Laboratorium IPA. Yogyakarta

Universitas Negeri Yogyakarta

Qushai. 2014. Sterilisasi. Surabaya : Unair

Riandi. Teknik Laboratorium. Jakarta: Erlangga. 2004.

Schlegel G. Hans. Mikrobiologi Umum Edisi 6. Yogyakarta: Gadjah Mada,

       University Press. 1998.

Suriawira. Pengantar Mikrobiologi Umum. Angkasa; Bandung. 1999.

Yusriani, dr. Kumpulan Diktat Kuliah Mikrobiologi. UIT; Makassar. 2008